Окраска сохраняется после добавления хлороводородной кислоты и кипячения в течение 1 мин. Ион кобальта можно также обнаружить после выпаривания и прокаливания цианокобаламина с сульфатом калия в присутствии серной кислоты. К остатку прибавляют насыщенный раствор роданида аммония в ацетоне, появляется сине-зеленое окрашивание: Со2++2NH4NCS—*■Co(NCS)2+ 2NH4+ Для испытания подлинности и чистоты, а также количественного определения цианокобаламина используют УФ-спектрофотометрию. Спектр поглощения цианокобаламина характеризуется 3 полосами поглощения с максимумами при 278, 361 и в диапазоне от 547 нм до 559 нм. Поглощение при 278 нм обусловлено наличием фрагмента 5,6-диметилбензимиазола, при 361 нм - корриновой системой с 6 сопряженными двойными связями, при 550 нм - наличием атома кобальта. Снимают спектр в диапазоне длин волн: от 260 нм до 610 нм, устанавливают отношение оптических плотностей: Азбі/А547_559— от 3,15 до 3,45; А361/А278 — от 5,4 до 5,7. Указанные параметры делают более надежной идентификацию цианокобаламина в УФ-области. Для идентификации также используют ТСХ: сорбент - силикагель G; подвижная фаза- раствор аммиака разведенный — метанол — метиленхлорид (9:30:45). Сопутствующие примеси определяют жидкостной хроматографией: сорбент - силикагель октилсилильный для хроматографии; подвижная фаза - метанола и динатрия гидрофосфата (26,5 : 73,5) раствор доведенный до pH 3,5 кислотой фосфорной. Сумма всех примесей не более 3%. Количественно определяют цианокобаламин в водных растворах при длине волны 361 нм, параллельно измеряя оптическую плотность ГСО цианокобаламина в тех же условиях или рассчитывают с учетом удельного показателя поглощения, равного 207.
RkJQdWJsaXNoZXIy MTExODQxMg==