раствор: готовят смешивая l -й и 2-й растворы (50 : 1 по объёму); реактив годен в течении дня; 4) реактив Фолина. Приготовление реактива Фолина. Для стандартного раствора 100г вольфрамата натрия (Na2W04 х 2Н20 ) и 25г молибдата натрия Na2Mo04 х 2Н20 растворяют в 700см3 воды. К смеси добавляют 50см3 85 %-го раствора фосфорной и 100см3 соляной кислот (р = 1,19). Затем кипятят (не слишком сильно) 10 ч с обратным холодильником в вытяжном шкафу. После этого в колбу добавляют 150г сернокислого лития, 50 см3 воды и 5 капель бромной воды. Смесь кипятят в течении 15 мин в вытяжном шкафу для удаления избытка брома, после охлаждения доводят водой до 1дм3. Затем фильтруют и хранят в тёмной склянке с притёртой пробкой. Раствор должен быть ярко-жёлтого цвета. Обычно перед употреблением реактив Фолина разбавляют в 2 раза. Раствор можно хранить длительное время. Ход работы К 0,4см3 раствора белка добавляют 2см3 опытного раствора. Смесь перемешивают и через Юмин приливают к ней 0,2см3 рабочего раствора Фолина. Интенсивность окраски определяют на ФЭК-56М с красным светофильтром (или на спектрофотометре при 750 нм) через ЗОмин. Количество белка в растворе находят по калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой 100 мг чистого белка (сывороточного у - глобулина, кристаллического альбумина и др.) растворяют в 100см3 0,1н NaOH (1см3 содержит 1мг белка). В 9 мерных колб на 10см3 приливают раствор белка в возрастающих количествах: 0,5см3, а затем от 1 до 8см3. Раствор в колбах доводят водой до метки, перемешивают и из каждой колбы берут’ по 0,4см3 для определения белка по указанной прописи. По полученным данным вычерчивают калибровочную кривую. Примечание. Определение белка данным методом в растительных объектах, содержащих фенолы, приводит к завышению результатов, так как они образуют аналогичную окраску с реактивами. Перед определением белка для удаления фенольных соединений необходима обработка ацетоном, охлажденным до —10°С.
RkJQdWJsaXNoZXIy MTExODQxMg==